安博体育官网登录入口:微生物实验人员应具备哪一些知识和技能？

来源：安博体育官网登录入口    发布时间：2025-10-02 12:27:05

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  一名合格的微生物实验人员应具备哪一些知识和技能？如果你正在被一些微生物实验问题困扰着，那么今天这个文章你点开就对了，“恍然大悟”、“茅塞顿开”、“醍醐灌顶”到底有没有用仔细看下就知道了。

  1.1.1 根据本实验室所涉及的生物安全等级，无菌室的设计和建设应符合GB 50364和GB 19489的相关要求。

  1.1.2 无菌室大小应能够很好的满足检验工作的需要，内墙为浅色，地面和地面应光滑，墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，无死角，易于清洁和消毒。

  1.1.3 无菌室入口处应设置缓冲间，缓冲间内应安装非手动式开关的洗手盆，并可有毛巾。缓冲间应有足够的面积以保证操作人员更换工作服及鞋帽。

  1.1.4 无菌室内工作台的高度约80cm,工作台应保持水平，工作台二应无渗漏，耐腐蚀，易于清洁、消毒。

  1.1.5 无菌室内光照应分布均匀，工作台面的光照度应不低于540Ix。

  1.1.6 无菌室应具备适当的通风和温度调节的条件。无菌室的推荐温度为20℃，相对湿度为40%~60%。

  1.1.7 缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置。

  1.3.1.1 紫外线.0m处的253.7nm紫外线,低于此值时应更换，适当数量的紫外灯，确保平均每立方米应不少于1.5W。

  （4）用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受到紫外线的直接照射，且应达到足够的照射剂量。

  （1）封闭无菌室内，无人条件下，采用20mg/m3浓度的臭氧,作用时间应30min。消毒后室内臭氧浓度0.2mg/m3时方可入内作业。

  （2）取样点的选择应基于人员流量情况和做试验的频率。正常的情况下，无菌室面积30m2时，从所设定的条对角线时，选取东西北中5点，其中东点、南点、西点、北点均距离墙lm.

  食品生产线次，异常停机时再取一次。每天取样12瓶，然后在12瓶中随机抽取3瓶做微生物检测。

  做微生物之前，在缓冲间用75%的酒精对样品外表进行杀菌。之后送到传递窗口处。避免样品对无菌间造成二次污染。

  工作台:将经灭菌的内径为5cm*5cm的灭菌规格板放在被检物体表面，用以浸有灭菌生理盐水的棉签在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。

  工人手:被检人五指并拢，用以浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。

  将已采集的样品在6h内送实验室，每支采样管充分混匀后取1mL样液，放入灭菌平皿内，倾注营养琼脂培养基，每个样品平行接种两个平皿，置35℃±2℃培养48h,计数平板上细菌菌落数。

  室内面积不超过30m3，在对角线上设里中外三点:里、外点位置距墙1m;室内面积超过30m3,设东西南北中5点，周围4点距墙1m。采样时，将含营养琼脂培养基的平板(直径9cm)置采样点(约桌面高度)，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5min。

  在采样前将准备好的营养琼脂培养基置35℃±2℃培养24h,取出检查有没有污染，将污染培养基剔除。

  将已采集的培养基在6h内送实验室，于35℃±2℃培养48h,观察结果，计数平板上细菌菌落数。

  用精确到0.01g的电子称称取8.5g微生物检测专用盐，在100mL烧杯中用二次净化水溶解后，转移到1000mL的无色透明的容量瓶并用二次净化水定容到1000mL备用。

  称取35g营养琼脂培养基用二次净化水在250mL的烧杯中溶解后，转移到1000mL的无色透明的容量瓶并用二次净化水定容到1000mL。然后用250mL的锥形瓶分装备用。

  将配置好的生理盐水用500mL的量筒按照每个锥形瓶装225mL的量进行分装。分装好用乳胶锥形瓶塞塞好锥形瓶，并用牛皮纸将瓶口包扎好。

  将配置好的营养琼脂用500mL的锥形瓶装进行分装。分装好用乳胶锥形瓶塞塞好锥形瓶，并用牛皮纸将瓶口包扎好。

  将配置好的营养琼脂用500mL的锥形瓶装进行分装。分装好用乳胶锥形瓶塞塞好锥形瓶，并用牛皮纸将瓶口包扎好。

  将配置好的乳糖胆盐用10mL的量管分装在玻璃试管中，试管规格为15*150mm,锥形瓶装进行分装。分装好用乳胶锥形瓶塞塞好锥形瓶，并用牛皮纸将瓶口包扎好。

  3.3.2 部分培养基(如嗜盐琼脂培养基，胆硫乳培养基等)，只能煮沸灭菌。

  3.3.4 即用型试剂不需灭菌，应参见相关国际标准或供应商使用说明，直接使用。

  将分装完毕的生理盐水，放在杀菌釜内，摆放好。然后关上杀菌釜， 打开电源，升温到80℃时，打开放气阀进行放气，待放气阀门喷出大量水蒸气时关上放气阀。升温至121℃开始计时，杀菌30min停止加热，进行自然冷却，待压力回归零时，打开放气阀门进行放气。等待杀菌釜内气压全部排净完后打开杀菌釜，将生理盐水取出送往微生物操作间的小窗内。

  将分装完毕的营养琼脂，放在杀菌釜内，摆放好。然后关上杀菌釜，打开电源，升温到80℃时，打开放气阀进行放气，待放气阀门喷出大量水蒸气时关上放气阀。升温至121℃开始计时，杀菌30min停止加热，进行自然冷却，待压力回归零时，打开放气阀门门进行放气。等待杀菌釜内气压全部排净完后打开杀菌釜，将生理盐水取出送往微生物操作间预处理间的水浴锅，进行保温，水浴锅的温度46±1℃.

  称取36g营养琼脂用二次净化水在250mL的烧杯中溶解后，转移到1000mL的无色透明的容量瓶并用二次净化水定容到1000mL。然后用250mL的锥形瓶分装备用。

  称取36g营养琼脂用二次净化水在250mL的烧杯中溶解后，转移到1000mL的无色透明的容量瓶并用二次净化水定容到1000mL。然后用250mL的锥形瓶分装备用。

  将分装完毕的营养琼脂，放在杀菌釜内，摆放好。然后关上杀菌釜，打开电源,升温到80℃时，打开放气阀进行放气，待放气阀门喷出大量水蒸气时关上放气阀。升温至121℃开始计时，杀菌30min停止加热，进行自然冷却，待压力回归零时，打开放气阀门进行放气。等待杀菌釜内气压全部排净完后打开杀菌釜，将生理盐水取出送往微生物操作间预处理间的水浴锅，进行保温，水浴锅的温度46℃±1℃。

  培养皿将培养基处理完，用84消毒液浸泡30min后，用洗洁精清理洗涤干净后用干燥箱烘干(160℃、30min)后，用牛皮包扎好，在160℃干热杀菌2小时。1mL的吸量管也用84消毒液浸泡30min后，用洗洁精清理洗涤干净后用干燥箱烘干(160℃、30min)后，用牛皮纸包扎好，在160℃干热杀菌2小时。

  3.8.2 干热灭菌:采用干燥箱灭菌，160℃灭菌2h,180℃灭菌1h，适用于玻璃器皿，不锈钢器具等。

  3.8.3 液体消毒剂消毒:使用适当浓度的自配或商业液体消毒剂对工作台面、器具或设备表明上进行消毒。可按照GB 15981的规定，评价自配或商业消毒剂的消毒效果;可按照ISO 18593,监测工作台面、器具或设备表面的消毒效果。

  每次做实验之前，用75%的酒精对无菌操作台和微生物操作间进行喷洒消毒，然后开启无菌操作台上面的紫外灯对无菌操作台杀菌30min以上。同时，开启微生物操作间紫外灯对空气杀菌消毒30min以上。

  4.1.2 微生物检验人员的工作服、帽、口罩和鞋子的杀菌。微生物检验人员的工作服、帽、口罩和鞋子在实验之前，在微生物操作缓冲间用紫外灯杀菌30min以上。操作人员在进入微生物操作间时，先用香皂清洗手，然后用消毒好的毛巾擦干手，再用75%的酒精对手进行喷洒杀菌。

  营养琼脂培养基在拿进微生物操作间时，先用75%的酒精喷酒消毒，因为锥形瓶外表面容易长菌，同时在打开锥形瓶塞是用酒精灯对瓶塞外表烤边进行杀菌。微生物操作时，倒平板时，培养皿应该靠近酒精灯，同时每次对锥形瓶口烤下。

  其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数:若状菌落不到平板的一半，而其余一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。

  若所有稀释度的平板上菌落数大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

  若所有稀释度的平板上菌落数小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

  若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

  若所有稀释度的平板上菌落数均不在30CFU300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

  菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约:取前2位数字，后面用0代替位数:也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

  选取菌落数在10CFU到150CFU的平板、根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可数。菌落数应采用两个平板的平均数。

  若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

  若所有稀释度的平板上菌落数小于10CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

  若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算:如为原液，则以小于1计数。

  菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约:取前2位数字，后面用0代替位数也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则可。采用两位有效数字。

  实验室负责人应确保每位操作人员均能按照说明书或设备操作指导书的要求做操作。

  所有设备档案应按照易于检索的方式存档。包括设备手册，使用说明书、维修保养指南:购买时所附带的全部技术资料以及采购、验收的记录。还应该搜集设备使用记录、维修保养记录等。

  7.1.3.1 应详细记录与预期质量控制结果不一致的情况，附上所采取的纠正措施，由负责分析的人员验证并通知实验室负责人。实验室负责人应定期审核这些记录。

  7.1.3.2 每台对检验测试质量有影响的设备应有使用记录本并放在设备附近。

  7.1.3.3 有关设备的每个事件都应记录在案，包括日期、事件、采取的纠正措施、登记人的姓名等。

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